Desenvolvimento de um biossensor para Ácido Glutâmico

A presente disserta����o tem com objetivo o desenvolvimento de um biossensor com base nos pol��meros de impress��o molecular para a dete����o de uma mol��cula alvo, o ��cido glutâmico que �� convertido em glutamina pela glutamina sintetase, recorrendo �� potenciometria. Nas c��lulas neopl��sicas a glutamina n��o �� sintetizada podendo-se considerar que o ��cido glutâmico �� um potencial agente anti-cancro. A t��cnica de impress��o mol��cular utilizada foi a polimeriza����o em bulk, combinando a acrilamida e a bis acrilamida com o ��cido glutâmico. Para se verificar se a resposta potenciom��trica obtida era de facto da mol��cula alvo foram preparados em paralelo com os sensores, materiais de controlo, ou seja, mol��culas sem impress��o mol��cular (NIP). Para se controlar a constitu������o qu��mica dos v��rios sensores nomeadamente, do NIP e do pol��mero de impress��o molecular (MIP) antes e ap��s a remo����o bem como a mol��cula foram realizados estudos de Espetroscopia de Infravermelhos de Transformada de Fourier (FTIR), Scanning electron microscope (SEM) e Espetroscopia de Raios X por dispers��o em energia (EDS). Os materiais desenvolvidos foram aplicados em v��rias membranas que diferiam umas das outras, sendo seletivas ao i��o. A avalia����o das caracter��sticas gerais das membranas baseou-se na an��lise das curvas de calibra����o, conseguidas em meios com pHs diferentes, comparando os v��rios el��trodos. O pH 5 foi o que apresentou melhor resultado, associado a uma membrana que continha um aditivo, o p-tetra-octilphenol, e com o sensor com percentagem de 3%. Posto isto, testou-se em material biol��gico, urina, com as melhores caracter��sticas quer em termos de sensibilidade (18,32mV/d��cada) quer em termos de linearidade (1,6x10-6 a 1,48x10-3 mol/L). Verificou-se ainda que aplicando i��es interferentes na solu����o, estes n��o interferem nesta, podendo ser aplicados na amostra sem que haja altera����o na resposta potenciom��trica. O el��trodo �� capaz de distinguir o ��cido glutâmico dos restantes i��es presentes na solu����o.

Glutamina mais ��cido glutâmico e aditivos fitog��nicos nas dietas de frangos de corte criados no sistema alternativo de produ����o

Coordena����o de Aperfei��oamento de Pessoal de N��vel Superior (CAPES)

Desenvolvimento de eletrodos modificados com poli ��cido glutâmico e sua aplica����o na an��lise de compostos antioxidantes e farmac��uticos

Coordena����o de Aperfei��oamento de Pessoal de N��vel Superior (CAPES)

Avalia����o ��ptica, ultraestrutural e express��o de prolifera����o celular da mucosa ent��rica de frangos de corte suplementados com glutamina e ��cido glutâmico

Coordena����o de Aperfei��oamento de Pessoal de N��vel Superior (CAPES)

Nucleot��deos e ��cido glutâmico em dietas de leit��es desmamados

Funda����o de Amparo �� Pesquisa do Estado de S��o Paulo (FAPESP)

Uso de ��cido glutâmico (syncron��) para indu����o de brota����o em macieiras "fuji kiku".

O Brasil figura entre os dez principais pa��ses produtores de ma���� mundial, produzindo em torno de 1.378.617 milh��es de toneladas de ma���� (55% da variedade Gala, 40% de Fuji e 5% de outras) na safra 2014/2015 (IBGE, 2016). As cultivares que representa a maior parte da produ����o brasileira, pertencem basicamente ao grupo ?Gala? e ?Fuji? - que possuem alto requerimento em frio. Por��m, suas exig��ncias clim��ticas n��o s��o plenamente atendidas, fazendo com que muitas gemas vegetativas e flor��feras permanecem dormentes, mesmo em condi����es ambientais favor��veis ao crescimento. A falta de brota����o nas gemas terminais e laterais tem efeito acumulativo com o passar dos anos, o que pode desencadear uma queda nas produ����es futuras. Com isso, �� necess��rio o uso de pr��ticas culturais que possam reverter esse quadro e promover a uniformidade de brota����o dessas fruteiras. Dentre as pr��ticas mais utilizadas est�� o uso de produtos qu��micos. A cianamida hidrogenada �� hoje a principal subst��ncia utilizada na cadeia produtiva de ma���� para induzir a brota����o de gemas ap��s o per��odo hibernal. Contudo, a busca de novas alternativas para indu����o da brota����o de gemas faz-se necess��ria para dispor ao setor produtivo indutores de 23 brota����o que agreguem elevada efici��ncia de brota����o de gemas, menor custo de utiliza����o e menor toxidade ao homem e impacto ambiental. Nesse sentido, objetivou-se com esse trabalho avaliar a utiliza����o de diferentes combina����es de ��cido glutâmico (Sycron�� 26 ) para indu����o de brota����o de macieiras 'Fuji Kiku' na regi��o de Vacaria, RS

Efeitos da hip��xia-isquemia pr��-natal durante o desenvolvimento: receptores e transportadores glutamat��rgicos e comunica����o celular in vitro

O c��rebro infantil humano submetido �� hip��xia-isquemia (HI) apresenta perda de oligodendr��citos, hipomieliniza����o, astrogliose, altera����es no desenvolvimento cortical e no comportamento motor, incluindo a paralisia cerebral. O cerebelo desempenha um importante papel no controle motor e diversos danos v��m sendo observados em humanos e animais que sofreram HI. A excitotoxicidade glutamat��rgica �� frequentemente associada �� HI e jun����es celulares podem ser respons��veis pela transfer��ncia de mol��culas capazes de modular os danos decorrentes. Dados pr��vios de nosso grupo utilizando um modelo de HI pr��-natal em ratos demonstraram danos permanentes na estrutura cerebelar, indicando que os efeitos delet��rios da HI pr��-natal podem ser mantidos at�� a vida adulta. O objetivo deste trabalho foi caracterizar os n��veis de conexinas, receptores e transportadores de glutamato ao longo do desenvolvimento do cerebelo HI, e avaliar a configura����o das jun����es celulares em culturas de astr��citos derivadas do cerebelo de ratos submetidos a esse modelo. Ratas no 18 dia de gesta����o, ap��s anestesia, tiveram as quatro art��rias uterinas obstru��das por 45 minutos (Grupo HI). Animais controle tiveram os ��teros expostos sem sofrer a obstru����o (Grupo SH). A gesta����o prosseguiu e apenas filhotes nascidos a termo foram utilizados. Os animais foram decapitados aos 2 (P2), 9 (P9), 16 (P16),23 (P23), 30 (P30), 45 (P45) e 90 (P90) dias p��s-natal. Os cerebelos foram submetidos �� t��cnica de Western blotting utilizando os anticorpos anti-NR2B, anti-GluR3, anti-EAAT1, anti-GFAP e anti-Cx43. Para a cultura de astr��citos foram utilizados cerebelos de animais P2. Ap��s terem atingido conflu��ncia, as c��lulas foram fixadas e imunomarcadas com os anticorpos anti-Cx43, anti-GFAP, anti-nestina e anti-A2B5. Nossos resultados demonstram diferen��as nos n��veis de GluR3 durante o desenvolvimento do cerebelo SH e HI, havendo uma redu����o significativa da express��o desta subunidade no grupo HI em P9. Por outro lado, n��o foram verificadas altera����es nos n��veis de NR2B e de GFAP entre os grupos nas diferentes idades. Observou-se redu����o significativa de Cx43 em animais HI em P2 bem como nos astr��citos HI em cultura, os quais tamb��m apresentaram altera����es morfol��gicas e diferen��as na express��o do marcador A2B5. A altera����o referente a GluR3 no grupo HI pode ser causada pela redu����o da arboriza����o das c��lulas de Purkinje e pela redu����o no n��mero de precursores de oligodendr��citos no cerebelo de animais HI em P9, j�� observadas em nosso laborat��rio. A diminui����o de Cx43 indica que a passagem de subst��ncias por canais astrocit��rios pode estar reduzida e contribuir para a expans��o dos danos persistentes descritos em HI. Altera����es morfol��gicas e na express��o de marcadores da diferencia����o de astr��citos podem refletir os potenciais efeitos de HI sobre a matura����o destas c��lulas a longo-prazo. Nossos resultados apontam que a HI sist��mica pr��-natal pode ser respons��vel por altera����es que caracterizam a excitotoxicidade glutamat��rgica. Ressaltamos tamb��m a import��ncia da comunica����o entre astr��citos como estrat��gia neuroprotetora nesta les��o.

Respuesta a la sequ��a de Pinus radiata D. Don y su implicaci��n en los procesos de tolerancia

160 p. (Bibliogr. 141-160)

Papel do antioxidante (vitamina C) na modula����o da press��o sangu��nea em ratos espontaneamente hipertensos (SHR)

A hipertens��o essencial humana, bem como a hipertens��o desenvolvida em Ratos Espontaneamente Hipertensos (SHR), s��o caracterizadas pelo desenvolvimento de Press��o Arterial (PA) elevada na medida em que a idade avan��a, sem identifica����o da causa prim��ria. Est�� bem estabelecido que este modelo animal apresenta estresse oxidativo (EOx) concomitante a hipertens��o. O mecanismo pelo qual o antioxidante reduz a press��o n��o est�� claro, por essa raz��o, �� necess��rio avaliar o comportamento destas enzimas envolvidas na homeostase da PA. Ratos Wistar-Kyoto (WKY) e SHR machos receberam ��cido asc��rbico, 200 mg / kg / dia por sonda orog��strica durante cinco semanas. A PA, a Hipertrofia Ventricular Esquerda (HVE), o Sistema Renina-Angiotensina (SRA), o Pept��deo Natriur��tico Atrial (ANP) e o EOx foram comparados entre os grupos por pletismografia, estereologia, microscopia confocal de varrimento a laser, microscopia eletr��nica de transmiss��o, western blotting e an��lise do RT-qPCR. Os SHR tratados com ��cido asc��rbico reduziram a PA e a HVE. Al��m disso, as enzimas envolvidas na homeostase da PA, a renina e a Enzima Conversora de Angiotensina (ECA) normalizaram-se, bem como os Receptores tipo 1 de Angiotensina II (AT1). A grande quantidade de gr��nulos de ANP no grupo SHR foi reduzida pelo tratamento com ��cido asc��rbico. O balan��o oxidativo foi restabelecido nos SHR tratados com este antioxidante. O EOx nos SHR eleva os n��veis de renina e de PA. Estas esp��cies reativas de oxig��nio podem ser envolvidas no mecanismo de sinaliza����o para aumentar a express��o de ANP nos mi��citos atriais. Estes dados tamb��m mostram que o tratamento com o antioxidante (vitamin C) reduz o EOx e normaliza a PA ao menos parcialmente pela redu����o de taxas de renina.

Chemical communication in the Mozambique tilapia: a role for amino acids

The Mozambique tilapia (Oreochromis mossambicus) is a maternal mouthbrooding cichlid from the southern Africa. The olfactory sensitivity of the species to 20 amino acids was assessed using the electro-olfactogram (EOG). We estimated whether the olfactory potency of the polar fraction of male urine can be explained by the presence of identified amino acids. In addition, filtrate and amino acid mixture of the urine of Nile tilapia were used to estimate their olfactory potency for O.mossambicus. Finally, concentrations of the main amino acids were measured in the urine of males of different social status and the correlations between amino acid concentration and hierarchical status were explored. L-cysteine, L-glutamine and L-threonine were the most potent stimuli at M while L-proline and L-aspartate were the least potent. Four groups of amino acids were identified according to their thresholds of detection and three groups ��� according to the similarity of their ��-factors. The estimated threshold of detection for O.mossambicus mixture was higher than that for the filtrate. On the contrary, the threshold of detection for the mixture of Nile tilapia was lower than that for the filtrate The concentration of L-arginine in the urine was positively correlated with fish dominance index. Both L-arginine and L-glutamic acid concentrations had much greater variability in dominant males (DI��0.5) than in subordinate males (DI��0.5). The urinary concentrations of L-phenylalanine had similar variability in dominant and subordinate groups. The Mozambique tilapia has olfactory sensitivity to all twenty amino acids tested. The fish showed more acute sensitivity to conspecific urine filtrate than to the heterospecific. Olfactory potency of O.mossambicus filtrate can be largely but not fully explained by the presence of L-arginine, L-glutamic acid and L-phenylalanine. Larginine and L-glutamic acid may indicate the dominance status of the fish and, possibly, individual identity.

Molecular characterization of Gla-rich protein (GRP) gene expression and function

Gla-rich protein (GRP) is a vitamin K-dependent protein related to bone and cartilage recently described. This protein is characterized by a large number of Gla (��-carboxyglutamic acid) residues being the protein with the highest Gla content of any known protein. It was found in a widely variety of tissues but highest levels was found in skeletal and cartilaginous tissues. This small secreted protein was also expressed and accumulated in soft tissues and it was clearly associated with calcification pathologies in the same tissues. Although the biological importance of GRP remains to be elucidated, it was suggested a physiological role in cartilage development and calcification process during vertebrate skeleton formation. Using zebrafish, an accepted model to study skeletal development, we have described two grp paralog genes, grp1 and grp2, which exhibited distinct patterns of expression, suggesting different regulatory pathways for each gene. Gene synteny analysis showed that grp2 gene is more closely related to tetrapod grp, although grp1 gene was proposed to be the vertebrate ortholog by sequence comparison. In addition, we identified a functional promoter of grp2 gene and using a functional approach we confirmed the involvement of transcription factors from Sox family (Sox9b and Sox10) in the regulation of grp2 expression. In an effort to provide more information about the function of grp isoforms, we generated two zebrafish transgenic lines capable to overexpress conditionally grp genes and possible roles in the skeleton development were studied. To better understand GRP function a mammalian system was used and the analysis of knockout mice showed that GRP is involved in chondrocyte maturation and the absence of GRP is associated to proteoglycans loss in calcified articular cartilage. In addition, we detected differences in chondrogenesis markers in articular chondrocyte primary culture. Overall, our data suggest a main role for GRP on chondrocyte differentiation.

Cloning of the Bone Gla Protein gene from the teleost fish Sparus aurata (gilthead seabream). Molecular organization, developmental appearance and evolutionary implications

Tese de Doutoramento, Biologia Molecular, Faculdade de Ci��ncias do Mar e do Ambiente, Universidade do Algarve, 2001

Study of the association of Gla Rich Protein (GRP) to human blood cells

Disserta����o de mestrado, Ci��ncias Biom��dicas, Departamento de Ci��ncias Biom��dicas e Biomedicina, Universidade do Algarve, 2013

Solubiliza����o do fosfato de ferro em meio de cultura

Funda����o de Amparo �� Pesquisa do Estado de S��o Paulo (FAPESP)

Digestibilidade do extrato de leveduras em frangos de corte

Funda����o de Amparo �� Pesquisa do Estado de S��o Paulo (FAPESP)